持續(xù)可靠的基因敲除
并非所有CRISPR文庫都是一樣的。我們的多向?qū)gRNA被設(shè)計(jì)用于靶向同一外顯子，以誘導(dǎo)大片段缺失，相比單一sgRNA，這是最可靠的敲除策略。
在對32個(gè)基因靶點(diǎn)進(jìn)行評估時(shí)，相對于單一sgRNA格式（69.6% KO分?jǐn)?shù)），采用多向?qū)Ц袷揭氲膕gRNA顯示出了更好的中位敲除效率，達(dá)到了89.9%的KO分?jǐn)?shù)，提高了29.2%。
采用多向?qū)gRNA可獲得更高的插入/缺失頻率
我們的多向?qū)gRNA在87.3%的時(shí)間內(nèi)比單一sgRNA編輯產(chǎn)生了更高的插入/缺失頻率。與多向?qū)嚓P(guān)的高敲除效率并不僅僅是由于包含了一個(gè)表現(xiàn)優(yōu)異的向?qū)В怯捎谌齻€(gè)向?qū)Ч餐饔谩?/p>
多向?qū)gRNA具有更高的插入/缺失頻率。使用多向?qū)揎椀膕gRNA（每個(gè)目標(biāo)3個(gè)向?qū)В┫鄬τ诿總€(gè)sgRNA單獨(dú)編輯（左圖）對基因進(jìn)行靶向編輯更為高效。在一項(xiàng)更大規(guī)模的實(shí)驗(yàn)中，分析了針對100個(gè)隨機(jī)選定的人類基因的300個(gè)獨(dú)特的修飾sgRNA，這些sgRNA分別在單向?qū)Ш投嘞驅(qū)?shí)驗(yàn)中進(jìn)行了分析（右圖）。多向?qū)Ь庉媽?dǎo)致的插入/缺失頻率比單向?qū)Ь庉嫺叱?7.3%，通常具有協(xié)同效應(yīng)。這表明我們的多向?qū)膸煸O(shè)計(jì)是進(jìn)行功能喪失CRISPR篩選的最佳方法。
多向?qū)膸鞂?shí)現(xiàn)了持續(xù)高效的基因敲除效率
由多向?qū)gRNA驅(qū)動(dòng)，我們的排列式CRISPR sgRNA文庫在大量基因靶點(diǎn)上實(shí)現(xiàn)了持續(xù)高效的基因敲除效率。
多向?qū)贸呗詫?shí)現(xiàn)高敲除得分。利用我們的多向?qū)惴?，?6個(gè)基因中，每個(gè)靶點(diǎn)最多轉(zhuǎn)染3個(gè)修飾sgRNA（通過核轉(zhuǎn)染）到U2OS-Cas9表達(dá)細(xì)胞系中。結(jié)果是77個(gè)基因的中位敲除得分為72.3%。由于測序錯(cuò)誤，86個(gè)基因中有9個(gè)未能成功。
